蛋白質(zhì)純化與鑒定實驗指南

序
前言
緒論
如何使用本指南
第1單元鈣調(diào)蛋白的純化
實驗1活性測定：鈣調(diào)蛋白組分的活性測定
實驗2組織提取物的制備
實驗3粗分級分離
實驗4離子交換層析
實驗5疏水作用層析
實驗6鈣調(diào)蛋白的鑒定：收率的計算
實驗7鈣調(diào)蛋白的鑒定：電泳
實驗8蛋白質(zhì)的裂解消化
實驗9反相高效液相色譜
實驗10鈣調(diào)蛋白的物理分析
實驗11鈣調(diào)蛋白的化學(xué)分析
試劑的配制
第2單元Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子AP-1的純化
實驗1Hela細(xì)胞核提取物的制備
實驗2SephacryS-300HR凝膠過濾層析
實驗3序列特異性DNA親和層析
實驗4DNA酶I足跡分析
實驗5凝膠遷移變動分析
實驗6肝素-SepharoseCL-2B的制備
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
第3單元大腸桿菌中過表達(dá)重組蛋白的純化
實驗1大腸桿菌細(xì)胞的破碎和包涵體的配制
實驗2包涵體沉淀的溶解.重折疊和離子交換層析
實驗3可溶性提取物的聚乙烯亞胺沉淀和免疫親和層析
實驗4定量測定與制備小結(jié)
實驗5蛋白質(zhì)的鑒定
方案補(bǔ)充實驗：從過表達(dá)細(xì)菌提純
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
第4單元鼠肝胰島素受體的溶解與純化
實驗1大鼠肝臟質(zhì)膜的分離
實驗2膜胰島素受體的溶解
實驗3溶解受體的凝集素親和層析
實驗4部分純化受體的胰島素親和層析
實驗5胰島素受體與胰島素的交聯(lián)
實驗6胰島素激素的胰島素受體自磷酸化
實驗7胰島素受體糖基化的分析
試劑的配制
參考文獻(xiàn)
附錄
附錄1pH的測量
附錄2緩沖液的配制
附錄3電導(dǎo)率的測量
附錄4固態(tài)硫酸銨法分級分離
附錄5蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳
附錄6蛋白質(zhì)的過甲酸氧化
附錄7用亞氨基二乙酸Sepharose6B分離磷酸肽
附錄8蛋白質(zhì)內(nèi)序分析用肽段的分離與純化
附錄9推薦讀物
技術(shù)索引
主題索引