細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞水平篩選（楊華軍）

學(xué)習(xí)情境一  接受任務(wù)，任務(wù)前信息收集     001
情境描述 001
學(xué)習(xí)目標(biāo) 001
任務(wù)書(shū) 001
任務(wù)分組 002
工作計(jì)劃 002
任務(wù)實(shí)施 003
評(píng)價(jià)反饋 004
相關(guān)知識(shí)  005
一、EGFR背景知識(shí) 005
1．藥物靶點(diǎn) 005
2．EGFR簡(jiǎn)介 005
3．EGFR抑制劑 006
二、實(shí)驗(yàn)方案討論結(jié)果案例 009
學(xué)習(xí)情境二  實(shí)驗(yàn)設(shè)施和實(shí)驗(yàn)設(shè)備     010
情境描述 010
學(xué)習(xí)目標(biāo) 010
任務(wù)書(shū) 010
任務(wù)分組 010
工作計(jì)劃 011
任務(wù)實(shí)施 012
評(píng)價(jià)反饋 014
相關(guān)知識(shí)  015
一、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室生物安全 015
二、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備 015
1．超凈工作臺(tái)、生物安全柜 016
2．細(xì)胞培養(yǎng)箱 017
3．恒溫水浴鍋 018
4．臺(tái)式離心機(jī) 018
5．冰箱和冰柜 019
6．細(xì)胞計(jì)數(shù)器 020
7．倒置顯微鏡 020
8．液氮罐 020
9．高壓滅菌鍋 020
三、試劑和耗材 021
1．細(xì)胞培養(yǎng)容器 021
2．吸管和移液器 022
3．離心管和細(xì)胞凍存管 023
4．細(xì)胞消化液 024
5．基礎(chǔ)培養(yǎng)基 024
6．血清 025
7．抗生素 025
四、無(wú)菌技術(shù) 026
1．無(wú)菌工作區(qū)域 026
2．良好的個(gè)人衛(wèi)生 026
3．無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基 026
4．無(wú)菌操作 026
學(xué)習(xí)情境三  細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存     028
情境描述 028
學(xué)習(xí)目標(biāo) 028
任務(wù)書(shū) 028
任務(wù)分組 028
工作計(jì)劃 029
任務(wù)實(shí)施 030
評(píng)價(jià)反饋 032
相關(guān)知識(shí)  033
一、液氮罐的使用 033
1．液氮的來(lái)源 033
2．液氮的特性 033
3．液氮使用注意事項(xiàng)   034
二、NCI-H1975細(xì)胞的復(fù)蘇 034
1．NCI-H1975細(xì)胞的相關(guān)信息 034
2．美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù) 035
3．復(fù)蘇NCI-H1975細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、試劑和耗材 035
4．復(fù)蘇NCI-H1975細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)流程 035
5．凍存NCI-H1975細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、試劑和耗材 037
6．凍存NCI-H1975細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)流程 037
學(xué)習(xí)情境四  細(xì)胞的傳代培養(yǎng)與觀察     038
情境描述 038
學(xué)習(xí)目標(biāo) 038
任務(wù)書(shū) 038
任務(wù)分組 038
工作計(jì)劃 039
任務(wù)實(shí)施 041
評(píng)價(jià)反饋 043
相關(guān)知識(shí)  044
一、細(xì)胞的常規(guī)觀察 044
1．細(xì)胞形態(tài) 044
2．細(xì)胞生長(zhǎng) 045
3．營(yíng)養(yǎng)液 046
4．生物污染 046
二、NCI-H1975細(xì)胞的傳代培養(yǎng) 049
1．傳代時(shí)間的確定 049
2．NCI-H1975細(xì)胞傳代所需的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、試劑和耗材 049
3．NCI-H1975細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)流程 049
4．懸浮細(xì)胞的傳代 050
三、細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞存活率的測(cè)定 050
1．血球計(jì)數(shù)板的基本構(gòu)造 050
2．使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞數(shù)目和存活率的測(cè)定 051
學(xué)習(xí)情境五  細(xì)胞鋪板及鋪板密度的確定     052
情境描述 052
學(xué)習(xí)目標(biāo) 052
任務(wù)書(shū) 052
任務(wù)分組 052
工作計(jì)劃 053
任務(wù)實(shí)施 054
評(píng)價(jià)反饋 055
相關(guān)知識(shí)  056
一、細(xì)胞鋪板 056
二、細(xì)胞梯度稀釋觀察法 058
三、細(xì)胞梯度稀釋生長(zhǎng)曲線法 059
學(xué)習(xí)情境六  細(xì)胞鋪板和藥物處理     061
情境描述 061
學(xué)習(xí)目標(biāo) 061
任務(wù)書(shū) 061
任務(wù)分組 061
工作計(jì)劃 062
任務(wù)實(shí)施 063
評(píng)價(jià)反饋 064
相關(guān)知識(shí)  066
一、細(xì)胞鋪板 066
二、藥物處理 066
1．藥物儲(chǔ)存液的配制 066
2．測(cè)試藥物的梯度稀釋 067
3．藥物處理 068
學(xué)習(xí)情境七  實(shí)驗(yàn)結(jié)果的檢測(cè)     069
情境描述 069
學(xué)習(xí)目標(biāo) 069
任務(wù)書(shū) 069
任務(wù)分組 069
工作計(jì)劃 070
任務(wù)實(shí)施 071
評(píng)價(jià)反饋 073
相關(guān)知識(shí)  074
一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的檢測(cè) 074
1．CellTiter-Glo?細(xì)胞活力檢測(cè)法 074
2．MTT法 075
3．CCK-8法 076
二、多功能酶標(biāo)儀的使用 078
學(xué)習(xí)情境八  實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理和呈現(xiàn)     079
情境描述 079
學(xué)習(xí)目標(biāo) 079
任務(wù)書(shū) 079
任務(wù)分組 079
工作計(jì)劃 080
任務(wù)實(shí)施 081
評(píng)價(jià)反饋 083
相關(guān)知識(shí)  084
一、測(cè)試藥物對(duì)細(xì)胞活性抑制率的計(jì)算 084
二、GraphPad Prism繪制量效曲線并計(jì)算IC50值 085
三、絕對(duì)IC50和相對(duì)IC50 090
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn) 091
參考文獻(xiàn)     092